ترانسفکشن سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گاوی در محیط آزمایشگاهی

نوع مقاله : مقاله کامل

نویسندگان

چکیده

در بالغین، سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی (SSCs) تنها سلول‌های بنیادی هستند که قادر به انتقال اطلاعات ژنتیکی به نسل بعد می‌‌باشند. با در نظر گرفتن این که یک SSC منفرد می‌تواند به تعداد زیادی از اسپرماتوزوآ تبدیل شود، دستکاری ژنتیکی این سلول‌ها، یک تکنولوژی نوین با کاربردهای عملی در گونه‌های مختلف حیوانی را مهیا می‌سازد. در این مطالعه ارزیابی انتقال ژنEnhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) به کلونی‌های اسپرماتوگونی گاوی از طریق حامل لیپوفکتامین می‌باشد. کارایی انتقال ژن خارجی EGFP به SSCs از طریق حامل لیپوفکتامین در سه روز از شروع کشت کلونی‌های اسپرماتوگونی (روز 4، 6 و 8) توسط میکروسکوپ فلورسنت ارزیابی شد. نتایج نشان داد که کلونی‌های ترانسفکت شده از طریق لیپوفکتامین در هر سه روز انجام ترانسفکشن در مقایسه با گروه‌های شاهد به طور معنی‌داری افزایش یافت (P<0.05). کلونی‌های ترانسفکت شده با لیپوفکتامین در مقایسه با گروه‌هایی که تنها حاوی ژن خارجی بدون حامل بودند نیز بالاتر بود (P<0.05). بیشترین میزان کلونی‌های ترانسفکت شده زمانی به دست آمد که ترانسفکشن در روز 4 کشت انجام شد. نتایج به دست آمده از این مطالعه پیشنهاد می‌کند که لیپوفکتامین می‌تواند به منظور انتقال مستقیم DNA خارجی به کلونی اسپرماتوگونی به ویژه در روز 4 کشت به صورت ایمن به کار رود.

کلیدواژه‌ها


Anway, MD; Folmer, J and Wright, WW (2003). Isolation of sertoli cells from adult rat testes: an approach to ex vivo studies of sertoli cell function. Biol. Reprod., 68: 996-1002.
Bellue, AR; Caricchia, JC; Millette, CF; O’Brien, DA; Bhatnagar, YM and Dym, M (1977). Spermatogonic cells of the prepubertal mouse. Isolation and characterization. J. Cell. Biol., 74: 1-9.
Brinster, RL and Avarbock, MR (1994). Germline trans-mission of donor haplotype following spermatogonial transplantation. Proc. Natl. Acad. Sci., 91: 11303-11307.
Dirami, G; Ravindranath, N; Pursel, V and Dym, M (1999). Effects of stem cell factor and granulocyte macrophage-colony stimulating factor on survival of porcine type A spermatogonia culture in KSOM. Biol. Reprod., 61: 225-230.
Felgner, PL; Gadek, TR; Holm, M and Roman, R (1987). Lipofection: a highly efficient, lipid-mediated DNA-transfection procedure. Proc. Natl. Sci., 84: 7413-7417.
Garrett, FE; Goel, SH; Yasul, J and Koch, RA (1999). Liposome fuse with sperm cells and induce activation by delivery of important agents. BBA. 1417: 77-88.
Izadyar, F; Creemers, LB and Van Dissel-Emiliani, FM (2000). Spermatogonial stem cell transplantation. Mol. Cell Endocrinol., 169: 21-26.
Izadyar, F; Sepierenberg, GT; Creemers, LB; Ouden, K and Rooij, DG (2002). Isolation and purification of type Aspermatogonia from the bovine testis. Reproduction. 124: 85-94.
Kubota, H and Brinster, RL (2008). Culture of rodent spermatogonial stem cells, male germline stem cells of the postnatal animal. Methods Cell Biol., 86: 59-84.
Lai, Y; Drobinskaya, I and Chuguang, L (2008). Genetic modification of cells for transplantation. Adv. Drug Deliv. Rev., 60: 146-159.
Nagona, M; Clayton, J; Kley, E and Mary, R (2001). Transgenic mice produced by retroviral transduction of male germ-line stem cells. PNAS., 98: 13090-13095.
Niu, Y and Liang, SH (2008). Progress in gene transfer by germ cells in mammals. J. Genet. Genomics. 35: 701-714.
Ogachi, S; Kamihira, M; You, J; Tachibana, A and Lijima, Sh (1998). Exogene gene transfection into quail embryo using cationic lipid vesicles. J. Ferment. Bioeng., 86: 118-120.
Sciamanna, I (2002). DNA dose and sequence dependence in sperm-mediated gene transfer. Mol. Reprod. Dev., 56: 301-305.
Whitelaw, CB and Lilico, SG (2008). Production of transgenic farm animals by viral vector-mediated gene transfer. Reprod. Domest. Anim., (Suppl. 43), 2: 355-389.
Xiang-Yang, M (2011). Production of transgenic animals using spermatogonial stem cells. Agri. Sci. in China. 10: 762-768.
Younezawa, T; Furahata, Y; Hirabayashi, K; Suzuki, M and Yamanouchi, K (2002). Protamine-derived synthetic enhanced the efficiency of sperm-mediated gene transfer using liposome-peptid-DNA complex. J. Reprod. Dev., 48: 281-286.