ردیابی آنتی ژن‌های اختصاصی ویروس بیماری نیوکاسل با استفاده از روش وسترن بلاتینگ

نوع مقاله : مقاله کامل

نویسندگان

چکیده

ویروس بیماری نیوکاسل (NDV) در سرتاسر جهان انتشار داشته و زیان‌های اقتصادی به صنعت طیور وارد می‌کند. با وجود چند صد سویه مختلف از ویروس تعیین آنتی ژن‌های اختصاصی سویه‌های واکسن و حاد اهمیت دارد. در مطالعات قبلی، پادتن‌های اختصاصی برای سویه‌های حاد و واکسن به روش جذب متقاطع و خالص سازی، تهیه و اختصاصیت آن‌ها به روش AGID مشخص شده و با روش‌های IF و DB-EIA تایید شده‌اند. در این مطالعه 9 جدایه از ویروس‌های حاد جدا شده طی سال‌های قبل و تایید شده به روش RT-PCR و آزمایش‌های سرولوژی به همراه دو سویه واکسینال B1 و لاسوتا به روش اولتراسانتریفیوژ خالص سازی شد و در ژل SDS-PAGE الکتروفورز و وسترن بلاتینگ آن با آنتی بادی‌های اختصاصی تهیه شده از قبل انجام شد. در الگوی الکتروفورز (آنتی ژن‌هایی با وزن مولکولی حدود 15، 38، 46، 48، 53، 55، 68، 74 و 220 کیلو دالتون) اختلافی بین سویه‌ها دیده نشد. در بررسی وسترن بلاتینگ واکنش اختصاصی در آنتی ژن‌هایی با وزن مولکولی حدود 15، 38، 48، 74 ،55 و 220 کیلو دالتون ردیابی گردید در حالی که واکنش غیر اختصاصی در پروتئین ویروسی با وزن مولکولی حدود 53 کیلو دالتون حضور داشت. این نتایج نشان می‌دهد که آنتی بادی‌های اختصاصی می‌توانند با گلیکوپروتئین‌های (پروتئین‌های هماگلوتینین-نورآمینیداز و فیوژن) سویه‌های NDV به صورت اختصاصی واکنش دهند در حالی که با پروتئین‌های داخلی (پروتئین ماتریکس و نوکلئوپروتئین) سویه‌های NDV واکنش غیر اختصاصی است.

کلیدواژه‌ها


Afonso, CL; Miller, PJ; Grund, Ch and Koch, GBP (2012). Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals. 7th Edn., Vol. 1, World Organization for Animal Health (OIE), Paris, France. PP: 555-576.
Alexander, D (1988). Newcastle disease diagnosis. In: Newcastle disease. USA, Springer. PP: 147-160.
Alexander, D (2000). Newcastle disease and other avian paramyxoviruses. Rev. Sci. Tech., 19: 443-462.
Dortmans, J; Rottier, P; Koch, G and Peeters, B (2010). The viral replication complex is associated with the virulence of Newcastle disease virus. J. Virol., 84: 10113-10120.
Dufour-Zavala, L (2008). A laboratory manual for the isolation, identification, and characterization of avian pathogens. 4th Edn., AAAP. PP: 221-230.
Garcia, SC; Lopez, RN; Morales, R; Olvera, MA; Marquez, MA; Merino, R; Miller, PJ and Afonso, CL (2013). Molecular epidemiology of Newcastle disease in Mexico and the potential spillover of viruses from poultry into wild bird species. Appl. Environ. Microbiol., 79: 4985-4992.
Gotoh, B; Ohnishi, Y; Inocencio, N; Esaki, E; Nakayama, K; Barr, P; Thomas, G and Nagai, Y (1992). Mammalian subtilisin-related proteinases in cleavage activation of the paramyxovirus fusion glycoprotein: superiority of furin/PACE to PC2 or PC1/PC3. J Virol., 66: 6391-6397.
Heiden, S; Grund, C; Röder, A; Granzow, H; Kühnel, D; Mettenleiter, TC and Römer-Oberdörfer, A (2014). Different regions of the Newcastle sisease virus fusion protein modulate pathogenicity. PLoS One. 9: e113344.
Hemmatzadeh, F and Alinejad, A (2003). A study on proteinal pattern of isolated NDV in Iran and comparison with live vaccine strains. Iran. J. Vet. Res., 58: 61-65.
Hemmatzadeh, F; Nayeri, B and Tofighi, E (2006). Antigenic differences in Newcastle disease viruses isolated in Iran. Int. J. Poult. Sci., 5: 408-410.
Hemmatzadeh, F; Nikbakht-Brojeni, G; Kateb, S; Mokhtari, F; Alinejad, A and Ghafari, M (2005). Designing of a specific immunoflurescence method for differentiation of velogenic and vaccinal strains of Newcastle disease virus. Iran. J. Vet. Res., 60: 393-399.
Hemmatzadeh, F and Sharifzadeh, A (2006). A specific dot-blot immunoassay for Newcastle disease serodiagnosis. Int. J. Poult. Sci., 5: 1079-1081.
Laemmli, UK (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227: 680-685.
Maclachlan, NJ; Dubovi, EJ and Fenner, F (2010). Fenner’s veterinary virology. 4th Edn., Amsterdam, Boston, Elsevier Academic Press. PP: 264-266.
Mahy, BW and Kangro, HO (1996). Virology methods manual. 1st Edn., Vol. 32, UK, Academic Press London. PP: 71-90.
Nagai, Y; Klenk, HD and Rott, R (1976). Proteolytic cleavage of the viral glycoproteins and its significance for the virulence of Newcastle disease virus. Virology. 72: 494-508.
Ogasawara, T; Gotoh, B; Suzuki, H; Asaka, J; Shimokata, K; Rott, R and Nagai, Y (1992). Expression of factor X and its significance for the determination of paramyxovirus tropism in the chick embryo. EMBO J., 11: 467-472.
Panda, A; Huang, Z; Elankumaran, S; Rockemann, DD and Samal, SK (2004). Role of fusion protein cleavage site in the virulence of Newcastle disease virus. Microb. Pathog., 36: 1-10.
Römer-Oberdörfer, A; Werner, O; Veits, J; Mebatsion, T and Mettenleiter, TC (2003). Contribution of the length of the HN protein and the sequence of the F protein cleavage site to Newcastle disease virus pathogenicity. J. Gen. Virol., 84: 3121-3129.
Sambrook, J; Russell, DW and Russell, DW (2001). Molecular cloning: a laboratory manual (3-volume set).
Steward, M; Vipond, IB; Millar, NS and Emmerson, PT (1993). RNA editing in Newcastle disease virus. J. Gen. Virol., 74: 2539-2548.
Tseung, H; Lai, C; Lin, D; Lin, Y; Chen, C; Lian, W and Chen, W (1993). Purification of envelope glycoproteins of the Newcastle disease virus. J. Chin. Soi. Vet. Sci., 19: 11-18.