اختلال ژنی در سالمونلا تیفی موریوم به روش λ red disruption تغییر یافته

نوع مقاله : مقاله کوتاه

نویسندگان

چکیده

تکنیک‌های زیادی برای غیر فعال کردن هدفمند ژن‌ها در باکتری‌ها وجود دارد که بعضی از آن‌ها در گونه‌های سالمونلا به کار برده شده است. در این مطالعه ترکیبی از SOEing PCR method و λ red disruption system برای حذف ژن phoP در سالمونلا تیفی موریوم بومی و استاندارد استفاده شد. سه واکنش استاندارد واکنش زنجیره‌ای پلیمراز و یک واکنش فیوژن واکنش زنجیره‌ای پلیمراز برای ساخت یک DNA خطی شامل بالادست و پایین دست ژن phoP و کاست کانامایسین انجام شد. به عنوان پلاسمید الگو از پلاسمید pKD4 استفاده شد که دارای ژن مقاومت به کانامایسین با نواحی FRT (جایگاه شناسایی FLP) در دو طرف می‌باشد. محصول خطی به دست آمده به سلول‌های صلاحیت‌دار سالمونلا تیفی موریوم الکتروپوریت شد. فقط تعدادی کلنی مربوط به سویه استاندارد ترانسفورمه روی LB آگار کانامایسین‌دار مشاهده شد و هیچ کلنی مربوط به سویه بومی بر روی این محیط پدیدار نشد. عدم موفقیت در ترانسفورمه کردن سویه بومی ممکن است به دلیل عدم سازگاری سیستم λ red disruption در این سویه و یا سیستم‌های restriction-modification ناشناخته باکتری بومی مورد آزمایش باشد. با این حال با استفاده از این محصول خطی می‌توان از گونه‌های مختلف سالمونلا سویه‌های موتان phoP به دست آورد که این به دلیل همولوژی زیاد این ژن در انواع سالمونلا می‌باشد.

کلیدواژه‌ها

فایل ها

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار