همسانه‌سازی و بیان بالای انترفرن گامای گاوی در یاخته‌های اوکاریوتی (COS-7)

نوع مقاله : مقاله کامل

نویسندگان

چکیده

انترفرن گاما یکی از سیتوکین‌های کلیدی‌ در تعیین پاسخ ایمنی وابسته به سلول‌هایT  کمکی نوع یک است. در این مطالعه از بافت طحال گاو RNA تام استخراج گردید و به کمک روش RT-PCR ژن انترفرن گامای گاوی همسانه‌سازی شد. cDNA ژن انترفرن گاما به ناقل بیانی پستانداریpcDNA3.1(+)  که تحت کنترل پیش برنده سیتومگالوویروس انسانی (CMV) است، انتقال یافت. پس از تعیین توالی ژن مشخص شد که ردیف اسید آمینه‌های این پروتئین با ردیف‌های گزارش شده در پایگاه اطلاعات ژنتیکی برای گاو (100%)، گوسفند (95%)، بز (95%)، شتر (86%)، لاما (83%)، اسب (77%)، سگ (75%)، گربه (75%)، انسان (61%)، موش (44%) و مرغ (35%) شباهت دارد. بیان ژن انترفرن گامای گاوی نو ترکیب در شرایط آزمایشگاهی با انجام آزمون الیزا تایید گردید. حداکثر بیان ژن در زمان‌های 96 و 144 ساعت بعد از ترانسفکشن در مایع رویی سلول‌های رده اپتلیال کلیه میمون (COS-7) بود. نتایج نشان می‌دهد که ناقل بیانی pcDNA3.1(+) و سلول‌های COS-7 ترانسفکت شده با روش دی اتیل آمینواتیل دکستران (DEAE) اجازه بیان ژن انترفرن گاما را داده و این پروتئین در مایع رویی کشت سلولی به خوبی ترشح می‌شود.

کلیدواژه‌ها

فایل ها

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار