تعیین دوزاژ ژن آسپارتیک پروتئاز در ژنوم آنکوسرکا ولولوس

نوع مقاله : مقاله کوتاه

چکیده

آسپارتیک پروتئازها گروه نسبتا کوچکی از آنزیم‌ها می‌باشند که در نماتودهای متفاوتی از جمله آنکوسرکا ولولوس بیان می‌شوند. در این تحقیق، یک گمانه زنی در مورد تعداد نسخه‌های ژن مربوط به کلون OV7A در یک گونه نزدیک به آنکوسرکا ولولوس به نام آنکوسرکا گیبسونی صورت می‌گیرد. این کار به کمک روش بلوتینگ شکافی انجام می‌شود. کلون OV7A حاوی یک cDNA کد کننده مربوط به دو سوم از کل ناحیه کد شونده پروتیئن آسپارتیک پروتئاز آنکوسرکا ولولوس می‌باشد. به منظور انجام هیبریداسیون، میزان معینی از رقت‌های سریالی مربوط به DNA ژنومی و DNA پلاسمیدی کلون OV7A به موازات یکدیگر بر روی پرده نایلونی بارگذاری گردید. به منظور تهیه جستجوگر نشاندار، cDNA کلون OV7A توسط پرایمر اختصاصی و به کمک روش PCR تکثیر یافت. پس از انجام هیبریداسیون شکافی، شدت رنگ لکه‌های ایجاد شده مربوط به DNA ژنومی و پلاسمیدی با یکدیگر مقایسه و سپس فراوانی توالی‌های مشابه نسبت به cDNA نشاندار محاسبه گردید. به منظور تایید نتایج به دست آمده، تکنیک بلوتیگ سوترن با کمک هضم DNA ژنومی به وسیله تعدادی از آنزیم‌های اندونوکلئاز محدودالاثر صورت گرفت. در بلوتینگ سوترن، عمل هیبریداسیون با جستجوگر اولیه نشان داد که در مواردی که توالی اختصاصی شناسایی آنزیم‌های اندونوکلئاز در جستجوگر موجود نیست، عمل هیبریداسیون منجر به مشاهد یک باند می‌گردد. این مطالعه آشکار ساخت که ژنوم آنکوسرکا حاوی یک نسخه از cDNA نشاندار به ازای هر هاپلوئید ژنوم می‌باشد.

کلیدواژه‌ها