کلونینگ و بیان قطعه‌ای از ژن نوکلئوپروتئین ویروس هاری در اشریشیا کولای و ارزیابی آنتی ژنیسیتی محصول بیان

نوع مقاله : مقاله کامل

نویسندگان

چکیده

نوکلئوپروتئین ویروس هاری (پروتئین N) RNA ژنومی ویروس را در کپسید محصور کرده و کمپلکس ریبونوکلئوپروتین ویروسی را تشکیل می‌دهد. این نوکلئوپروتیئن‌ها ساختارهای بسیار سازمان یافته‌ای هستند که تکثیر سلول‌های B و تولید آنتی بادی‌های ضد پروتئین N را فعال می‌کنند. علاوه بر سلول B، نوکلئوپروتئین ویروس هاری نشان داده شده است که پاسخ‌های قوی سلول T کمکی را القا می‌کند که منجر به یک پاسخ ایمنی هومورال طولانی مدت و قوی می‌شود. پروتئین N ویروس هاری یک هدف مولکولی انتخابی برای توسعه ابزار تشخیص عفونت حاد هاری است. ما یک قطعه C-terminal نوترکیب واکنشی ایمنی از پروتئین N ویروس هاری تولید کردیم که دارای یک شاخص آنتی ژنیکی واقع در بین موقعیت‌های 360 تا 390 است. ژن سنتزی کد کننده پروتئین N به منظور تولید آنتی ژن نوترکیب در سلول‌های BL21 (DE3) باکتری اشریشیا کولای درون یک پلاسمید بیان کلون شد. SDS-PAGE حضور یک محصول با وزن مولکولی مورد انتظار (kDa 44) را نشان داد. قطعه نوترکیب پروتئین N به طور موثر آنتی بادی‌های موجود در سرم‌های موش‌های ایمن شده با یک ویروس غیر فعال شده هاری را شناسایی کرد. بنابراین، آنتی ژن نوترکیب تولید شده از نوکلئوپروتئین ویروس هاری می‌تواند در سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم برای تشخیص عفونت هاری مورد استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه‌ها


Akihiko, K; Harufusa, T; Tadafumi, ST; Takuo, T; Yoshikazu, H and Kinjiro, M (1999). Nucleocapsid formation and/or subsequent conformational change of rabies virus nucleoprotein (N) is a prerequisite step for acquiring the phosphatase-sensitive epitope of monoclonal antibody. Virology. 263: 395-407.
Dietzschold, B; Lafon, M; Wang, H; Otvos, LJr; Celis, E; Wunner, WH and Koprowski, H (1987). Localization and immunological characterization of antigenic domains of the rabies virus internal N and NS proteins. Virus Res., 8: 103-125.
Fanayi, K; Ajorloo, M; Mozhgani, SHR; Irani, S and Gholami, A (2014). Design, construction and expression of recombinant vector containing the rabies virus nucleo-protein gene. TehranUniv. Med. J., 72: 294-300.
Flamand, A; Wiktor, TJ and Koprowski, H (1980). Use of hybridoma monoclonal antibodies in the detection of antigenic differences between rabies and rabies-related virus proteins. I. The nucleocapsid protein. J. Gen. Virol., 48: 97-104.
Goto, H; Minamoto, N; Ito, H; Luo, TR; Sugiyama, M; Kinjo, T and Kavai, A (1995). Expression of the nucleo-protein of rabies virus in Escherichia coli and mapping of antigenic sites. Arch. Virol., 140: 1061-1074.
Guy, S; Frederic, I; Manos, M; Danielle, B and Rob, WHR (2001). Structure of recombinant rabies virus nucleoprotein -RNA complex and identification of the phosphoprotein binding site. J. Virol., 75: 490-498.
Hiroyuki, F; Yoshiko, T; Kumato, M; Kazuhiro, H; Akira, N and Kazuaki, M (1994). Protective efficacy in mice of post-exposure vaccination with vaccinia virus recombinant expressing either rabies virus glycoprotein or nucleo-protein. J. Gen. Virol., 75: 1339-1344.
Inoue, S; Motoi, Y; Kashimura, T; Ono, K and Ya-Mada, A (2003). Safe and easy monitoring of anti-rabies anti-body in dogs using his-tagged recombinant N-protein. Jpn. J. Infect. Dis., 56: 158-160.
Katayama, S; Yamanaka, M; Ota, S and Shimizu, YA (1999). New quantitative method for rabies virus by detection of nucleoprotein in virion using Elisa. J. Vet. Med. Sci., 61: 411-416.
Lafon, M and Wiktor, TJ (1985). Antigenic sites on the ERA rabies virus nucleoprotein and non-structural protein. J.
Gen. Virol., 66: 2125-2133.
Manjunatha, RGB; Singh, R; Singh, RP; Singh, KP; Gupta, PK; Anita, D; Shankar, SK; Ramakrishnan, MA and Rishendra, V (2011). Molecular characterization of Indian rabies virus isolates by partial sequencing of nucleoprotein (N) and phosphoprotein (P) genes. Virus Genes. 43: 13-17.
Masatani, T; Ito, N; Shimizu, K; Ito, Y; Nakagawa, K; Abe, M; Yamaoka, S and Sugiyama, M (2011). Amino acids at positions 273 and 394 in rabies virus nucleoprotein are important for both evasion of host RIG-I-mediated antiviral response and pathogenicity. Virus Res., 155: 168-174.
Masatani, T; Naoto, I; Kenta, S; Yuki, I; Keisuke, N; Yoshiharu, S; Hiroyuki, K and Makoto, S (2010). Rabies virus nucleoprotein functions to evade activation of the RIG-I-mediated antiviral response. J. Virol., 84: 4002-4012.
Minamoto, N; Tanaka, H; Hishida, M; Goto, H; Ito, H; Naruse, S; Yamamoto, K; Sugiyama, M; Kinjo, T; Mannen, K and Mifune, K (1994). Linear and conformation-dependent antigenic sites on the nucleoprotein of rabies virus. Microbiol. Immunol., 38: 449-455.
Wangbin, C; Ying, H; Qiumei, S; Cairan, Y and Yanying, Z (2013). Expression of nucleoprotein gene of CTN strain rabies virus from China in E. coli with antigenicity. Open J. Vet. Med., 3: 309-313.
Xiangping, Y; Zhiyong, L; Jiangtao, L; Yongzhu, Y; Yun, Z; Xuerui, L; Baoyu, L; Bin, Y; Xi, L; Yinv, L; Wenqiang, J; Zhifang, Z and Jixing, L (2013). Rabies virus nucleoprotein expressed in silkworm pupae at high-levels and evaluation of immune responses in mice. J. Biotechnol., 163: 333-338.
Yan, J; Yong, HL; Frank, M; Robert, JH; Ying, H and Zhen, FF (2010). Characterization of conformation-specific monoclonal antibodies against rabies virus nucleo-protein. Arch. Virol., 155: 1187-1192.