Shiraz University Iranian Journal of Veterinary Research 1728-1997 8 4 2007 12 01 Prevalence of Escherichia coli O157:H7 on dairy farms in Shiraz, Iran by immunomagnetic separation and multiplex PCR تعیین میزان وقوع باکتری اشریشیا کولایO157:H7 در گاوداری‌های شیری صنعتی شیراز به روش IMS و M-PCR 319 324 8 10.22099/ijvr.2007.8 EN Masoud Sami Department of Food Hygiene and Public Health, School of Veterinary Medicine, Shahid Bahonar University of Kerman, Kerman, Iran Roya Firouzi Department of Pathobiology, School of Veterinary Medicine, University of Shiraz, Shiraz, Iran Seyed Shahram Shekarforoush Department of Food Hygiene and Public Health, School of Veterinary Medicine, University of Shiraz, Shiraz, Iran Journal Article 2006 06 25 <p>To identify the reservoirs of shiga toxin-producing Escherichia coli O157, sensitive detection and<br />isolation methods are necessary. The sensitivity of traditional culture methods can be improved significantly<br />by the inclusion of an immunoconcentration step, resulting in less false-negative results. In this study,<br />enrichment procedure and immunomagnetic separation (IMS) were compared for use in conjunction with a<br />multiplex polymerase chain reaction (M-PCR) method for detection of genes stx1, stx2, eaeA and hlyA. A<br />total number of 975 faecal samples were collected from 26 dairy farms in Shiraz area, Shiraz, southern Iran.<br />The samples were cultured at 37°C for 18–24 hrs in modified tryptic soy broth (m-TSB). Each of five<br />enriched samples were pooled and examined in two ways—direct PCR and IMS. The detection limit of the<br />M-PCR protocol for seeded E. coli O157:H7:ATCC:43895 in m-TSB without stool was 1.23 × 102 CFU/ml,<br />whereas it was 1.23 × 106 CFU/ml with enriched faecal sample. In direct PCR of enriched samples, no<br />positive sample was detected. However, in IMS of enriched samples one specimen was positive. The<br />prevalence of E. coli O157:H7 in faeces of cows in examined farms was 0.51% and the herd prevalence was<br />3.86%. Isolation of this serotype from faecal samples indicates that cattle are reservoirs of this pathogen and<br />potentially a source of human infection. This finding is of considerable public health importance</p> <p>به منظور تشخیص مخازن <em>اشریشیا کولای</em> O157 تولید کننده توکسین شیگا، روش‌های جداسازی و تشخیصی حساس مورد نیاز می‌باشد. حساسیت روش‌های متداول کشت را با استفاده از روش‌های ایمنولوژیک تغلیظی به طور معنی‌داری می‌توان افزایش داد و نتایج منفی کاذب کمتری به دست آورد. در مطالعه حاضر روش غنی‌سازی و جداسازی ایمنو مگنتیک (IMS) همراه با آزمایش واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز چندگانه (M-PCR) به منظور تشخیص ژن‌های <em>hly</em>A، <em>eae</em>A، <em>stx</em>₂ و <em>stx</em>₁ مورد مقایسه قرار گرفتند. در این مطالعه تعداد 975 نمونه مدفوع از 26 گاوداری شیری صنعتی اطراف شیراز اخذ گردید. نمونه‌های اخذ شده در محیط کشت برات تریپتوز سویا برات تغییر یافته(m-TSB)  و در دمای °C37 به مدت 18 تا 24 ساعت غنی‌سازی شدند. نمونه‌های غنی‌سازی شده به صورت 5 تایی با هم مخلوط شده و با دو روشPCR  و IMS مورد آزمایش قرار گرفتند. در ارزیابی حساسیت روش        M-PCR به کار رفته، حداقل تعداد باکتری <em>اشریشیا کولای</em> O157:H7 در واکنش مثبت، CFU 10² × 23/1 در میلی‌لیتر      m-TSB بدون حضور مدفوع و CFU 10⁶ × 23/1 در میلی‌لیتر مدفوع غنی شده در m-TSB به دست آمد. در PCR نمونه‌های غنی شده هیچ مورد مثبتی شناسایی نشد اما در روش IMS یک نمونه مثبت تشخیص داده شد و با روش M-PCR صحت آن تایید گردید. میزان وقوع این باکتری در مدفوع گاوهای شیری گاوداری‌های شیراز برابر 51/0% و میزان وقوع گله‌ای این باکتری 86/3% به دست آمد. جداسازی این سروتیپ از نمونه‌های مدفوع نشان می‌دهد که گاو مخزن این پاتوژن است و می‌تواند منشا عفونت برای انسان واقع شود. این یافته دارای اهمیت قابل توجهی از دیدگاه بهداشت عمومی می‌باشد</p> https://ijvr.shirazu.ac.ir/article_8_813e40c15ea07d45b9c91feffafca0ed.pdf