@article { author = {Mirhaj, H. and Honari, H. and Zamani, E.}, title = {Evaluation of immune response to recombinant Bacillus anthracis LFD1-PA4 chimeric protein}, journal = {Iranian Journal of Veterinary Research}, volume = {20}, number = {2}, pages = {112-119}, year = {2019}, publisher = {Shiraz University}, issn = {1728-1997}, eissn = {2252-0589}, doi = {10.22099/ijvr.2019.5259}, abstract = {Background: Anthrax is a particularly dangerous infectious disease that affects humans and livestock. Efficacious vaccines that can rapidly induce a long-term immune response are required to prevent anthrax infection in humans. Domains 4 and 1 of the protective antigen (PA) and lethal factor (LF), respectively, have very high antigenic properties. Aims: In this experimental study, the pET28a-lfD1-pa4 expression vector was designed, constructed and transferred into E. coli BL21 (DE3) plysS. Methods: For this purpose, pa4 gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and cloned in a pGEM T-easy vector. The pGEM-pa4 and pGEM-lfD1 were digested by XbaI and HindIII enzymes. The ligation reaction was performed by ligase T4 enzyme and the gene cassette, lfD1-pa4, was subcloned in pET28a and transferred to E. coli BL21 (DE3) PlysS. Expression and purification of chimeric proteins were confirmed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blotting techniques. The chimera LFD1-PA4 and mixed LFD1+PA4 proteins were injected four times into mice and antibody production was relativity evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test. Results: The results showed that both chimeric and mixed proteins are immunogenic, but LFD1-PA4 has a higher potential to stimulate mice immune system. Conclusion: LFD1-PA4 chimeric protein induced a higher immune response than LFD1+PA4 mixed protein and elicited antibody responses to LF and edema factor (EF), therefore, it holds promise to be a more effective trivalent vaccine candidate to use in anthrax prevention.}, keywords = {Anthrax,Antibody titer,LFD1,LFD1-PA4,PA4}, title_fa = {ارزیابی پاسخ ایمنی نسبت به پروتئین کایمریک نو ترکیب LFD1-PA4 باکتری باسیلوس آنتراسیس}, abstract_fa = {پیشینه: سیاه زخم بیماری عفونی بسیار خطرناکی است که انسان و دام‌های اهلی را تحت تاثیر قرار می‌دهد. به منظور حفاظت انسان در برابر عفونت سیاه زخم، واکسن‌های موثر که بتوانند پاسخ ایمنی سریع و بلند مدت ایجاد کنند ضروری می‌باشد. ناحیه 4، آنتی ژن حفاظتی (PA) و ناحیه 1، فاکتور کشنده (LF)، دارای خاصیت آنتی ژنی بسیار قویی می‌باشند. هدف: در این مطالعه تجربی، با ترکیب این دو ناحیه، کاست ژنی lfD1-pa4 طراحی و در وکتور بیانی pET28a(+) همسانه سازی و به باکتری (DE3) PlysS E. coli BL21 منتقل گردید. روش کار: برای این منظور ژن pa4 با واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) تکثیر و در ناقل pGEM-T Easy Vector همسانه سازی شد. هضم آنزیمی pGEM-pa4 و pGEM-lfD1 با آنزیم‌های XbaI و HindIII، انجام گرفت. واکنش الحاق توسط آنزیم T4 لیگاز انجام و کاست ژنی، lfD1-pa4، در pET28a زیر همسانه سازی و به باکتری E. coli BL21 (DE3) PlysS منتقل گردید. بیان و تخلیص پروتئین کایمریک با روش ‌الکتروفورز روی ژل پلی آکریل آمید سدیم دودسیل سولفات (SDS-PAGE) و وسترن بلاتینگ مورد تایید قرار گرفت. به منظور بررسی پاسخ ایمنی، پروتئین کایمریک (LFD1-PA4) و ترکیبی (LFD1+PA4) طی چهار نوبت به موش تزریق و بعد از جمع‌آوری نمونه‌های خون، میزان پادتن حاصل با آزمون سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA) مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: یافته‌های حاصل نشان می‌دهد که پروتئین‌های کایمریک و ترکیبی هر دو ایمونوژنیک می‌باشند با این حال پروتئین LFD1-PA4 سیستم ایمنی موش را به میزان بیشتری تحریک می‌نماید. نتیجه‌گیری: پروتئین کایمریک LFD1-PA4 پاسخ ایمنی قوی‌تر نسبت به پروتئین ترکیبی LFD1+PA4 ایجاد کرده و باعث پاسخ آنتی بادی نسبت به فاکتور کشنده (LF) و فاکتور ادم (EF) شد. بنابراین این امید می‌رود که این پروتئین کاندیدای واکسن سه ظرفیتی موثرتری جهت پیشگیری از بیماری سیاه زخم باشد.}, keywords_fa = {سیاه زخم,عیار پادتن,LFD1,LFD1-PA4,PA4}, url = {https://ijvr.shirazu.ac.ir/article_5259.html}, eprint = {https://ijvr.shirazu.ac.ir/article_5259_e46b0f4fb04b3bbfe6ec2e38903c65f5.pdf} }